Які речовини впливають на аналіз Бредфорда?
На відміну від інших аналізів білка, аналіз білка Бредфорда менш чутливий до впливу різних хімічних сполук, таких як натрій, калій або навіть вуглеводи, такі як сахароза, які можуть бути присутніми в зразках білка. Винятком є підвищена концентрація миючого засобу.
Реагенти, які змінюють рН аналізу або містять високий рівень детергентів буде перешкоджати аналізу Бредфорда.
Такі фактори, як час завантаження, матеріал кювети та температура барвника все це може вплинути на результати, отримані в результаті процесу. Нижче наведено кілька корисних порад, які допоможуть розрахувати точну концентрацію білка та дозволять вам отримати максимальну віддачу від аналізу білка Бредфорда.
Найбільшим недоліком аналізу білка Бредфорда є те, що він не працює, якщо в зразку є детергенти або поверхнево-активні речовини, або якщо зразок основний. Особливо поверхнево-активні речовини, які часто використовуються для розчинення деяких типів білків, заважатимуть тесту, спричиняючи випадання барвника в осад.
Потенційні джерела помилок у методі Бредфорда включають забруднення зразків, неповна денатурація білків і варіації в зв'язуванні барвників між різними білками. Крім того, використання неправильного коефіцієнта розведення або неточного вимірювання об’єму зразка також може призвести до помилок.
Проблема: Абсорбція стандарту нижча за очікувану
- Можлива причина: реагенти для барвників занадто старі або зберігалися неправильно. …
- Можлива причина: стандартні розведення приготовані неправильно. …
- Можлива причина: барвник може бути занадто холодним. …
- Можлива причина: абсорбція виміряна на неправильній довжині хвилі.