Який принцип визначення білка біцинхонінової кислоти?

Принцип аналізу білка біцинхонінової кислоти (BCA) Аналіз BCA заснований на відновленні Cu²⁺ іонів до Cu¹⁺ іонів білком у лужному середовищі. Cu¹⁺ потім іони реагують з біцинхоніновою кислотою (BCA) і утворюють комплекс, який поглинає світло при 562 нм, що можна виміряти за допомогою спектрофотометра.

Метод аналізу BCA заснований на тому факті, що натрієва сіль біцинхонінової кислоти реагує з іоном міді, що утворюється в результаті біуретової реакції в лужних умовах. Пептидні зв'язки і деякі амінокислоти, такі як цистеїн, триптофан і тирозин, здатні відновлювати іон міді (Cu2+) до іона міді (Cu+).

Аналіз CBQCA (робочий діапазон = 10 нг до 150 мкг) вимірює кількість первинних амінів, присутніх на пептидах або білках за допомогою високоспецифічної реакції між CBQCA та первинними амінами в присутності ціаніду (19).

Аналіз білка BCA використовується для кількісно визначити загальний білок у біологічному зразку. BCA означає біцинхонінову кислоту, яка є ключовим реагентом, який використовується для виробництва кольорового продукту. Фіолетовий продукт аналізують за стандартною кривою, щоб визначити концентрацію білка.

Бредфордський аналіз білка вимірює концентрацію білка в зразку. Цей аналіз діє на вимірювання зміни кольору, досягнутої за допомогою основних амінокислот у поєднанні з барвником кумасі, який у кислих умовах змінює колір зразка з коричневого на синій.

Принцип цих аналізів такий для оцінки фізичного та фізіологічного здоров'я клітин у відповідь на позаклітинні подразники або хімічні агенти. Наприклад, ці аналізи використовуються для оцінки ефектів ліків in vitro в клітинно-опосередкованих аналізах цитотоксичності, які використовуються для вимірювання клітинної проліферації.