Що робити, якщо концентрація праймера в ПЛР занадто висока?

Використання праймерів високої концентрації може збільшити ймовірність зв'язування праймерів з неспецифічними сайтами на матриці або один з одним. Використовуйте добре розроблені праймери з концентрацією 0,2–1 мкМ у кінцевій реакції. Крім того, переконайтеся, що виробник надав правильну концентрацію.

0,1–1 мкМ Під час встановлення ПЛР до реакції додають праймери в діапазоні 0,1–1 мкМ. Для праймерів із виродженими основами або тих, що використовуються в довгій ПЛР, концентрації праймерів 0,3–1 мкМ часто є сприятливими.');})();(function(){window.jsl.dh('1o7rZtbxDuaQ4dUPn-2j-AU__23', '

Оптимальна довжина ПЛР-праймера становить від 18 до 24 п.н. Довші праймери менш ефективні під час етапу відпалу, що призводить до меншої кількості продукту ПЛР. І навпаки, коротші праймери є менш специфічними під час фази відпалу, що призводить до більш неспецифічного зв’язування та ампліфікації.

деякі поширені причини:

• Поганий дизайн грунтовки.
• Погана якість ДНК.
• Неправильні умови ПЛР.
• забруднення.
• Проблеми, пов'язані з ферментами.
• Проблеми з приладами.
• Неправильна концентрація грунтовки.

Високий вміст GC гена створює ускладнення під час конструювання праймерів невідповідність і висока температура відпалу, утворення власного димера та вторинна структура. Іноді ампліфікація гена зазвичай не досягається звичайними методами ПЛР.

Використання високої концентрації праймерів може збільшити ймовірність зв'язування праймерів з неспецифічними сайтами на шаблоні або один з одним. Використовуйте добре розроблені праймери з концентрацією 0,2–1 мкМ у кінцевій реакції. Крім того, переконайтеся, що виробник надав правильну концентрацію.