Що таке протокол заморожування гемопоетичних стовбурових клітин?

Ми зберігаємо продукт стовбурових клітин кісткового мозку або периферичної крові при початковій температурі –4°C [6]. Потім зразок заморожують до цільової температури від -156 °C (при зберіганні в паровій фазі) до -196 °C (при зберіганні в рідкій фазі), залежно від того, де в контейнері зберігається зразок.

Клітини слід заморожувати повільно зі швидкістю 1°C/хв. Цього можна досягти за допомогою програмованого охолоджувача або помістивши флакони в ізольовану коробку, поміщену в морозильну камеру з температурою від –70 °C до –90 °C, а потім перемістивши їх у сховище рідкого азоту.

Frosty або контейнер без ізопропанолу, наприклад Corning® CoolCell®, і помістіть їх на ніч у морозильну камеру -80°C. Це дозволить клітинам замерзати приблизно за -1°C/хв, що ідеально підходить для заморожування більшості типів клітин. Ви також можете використовувати морозилку з контрольованою швидкістю та зберігати флакони безпосередньо при -80°C.

Перемістіть флакони в контейнер для заморожування з ізопропанолом і помістіть у морозилку при -80°C на ніч. Клітини заморожуватимуться зі швидкістю 1°C на хвилину в контейнері для заморожування ізопропанолу. Наступного дня швидко перемістіть заморожені флакони в резервуар для зберігання рідкого азоту за допомогою металевих щипців.

Швидко загорніть усі зразки в попередньо охолоджену фольгу з маркуванням і помістіть у попередньо охолоджений поліетиленовий пакет у морозилку. Зберігати при -80°C. температурі протягом приблизно 30 хвилин. тканини були свіжозаморожені або попередньо фіксовані з подальшим кріопротекцією.

Ви вже культивували свої клітини 2-5 проходів перш ніж заморозити їх, важливо використовувати ці клітини на низьких пасажах у будь-яких експериментах, особливо для диференціювання, оскільки первинні мезенхімальні стовбурові клітини кісткового мозку старіють на вищих пасажах.